NanoBRETアッセイがp53 Y220Cリガンドの生細胞内標的結合を検証
- 研究チームは、報告されているp53 Y220Cリガンドが生細胞内で実際に変異体タンパク質に結合するかを検証するため、生細胞NanoBRETアッセイを構築した。
- このBRETベースの読み出しにより、既知のY220C安定化・再活性化化合物について細胞内での標的結合の強さを比較でき、従来の生化学的結合データを補完する。
- こうした細胞内での検証は、膜透過性と細胞内での標的占有率を確認するものであり、創薬が難しいこのp53キャビティ変異体において、ヒットからリードへ進める重要な関門となる。
💡 ポイント
DSFやITCでは見栄えの良い結合を示す化合物でも、あの埋没した極性キャビティへ膜を越えて到達する段階でしばしば頓挫する——細胞内BRETランキングは、Y220Cのヒット化合物をSARに進める前に、まさにその失敗パターンを見抜くために設計されたものだ。とはいえ、p21誘導やアポトーシスといった機能的な読み出しと突き合わせ、rezatapopt(PC14586)の細胞内エンゲージメント幅と直接比較するまでは、このランキングを生化学的Kdより信頼する気にはまだなれない。
NanoBRET Target Engagement Enables Validation of p53 Y220C Ligands in a Cellular Context ↗